孕期弓形虫感染致不良妊娠结局发生的免疫预防及治疗手段的探索

1. 任务来源： 本课题为2009年烟台市科技发展计划项目（项目编号：2010172）。

2. 应用领域和技术原理： 本课题通过建立早孕期弓形虫感染动物模型和体外感染分离纯化的人滋养层细胞，检测弓形虫感染后母胎界面Th1/Th2平衡状态。证实了母胎界面Th1/Th2平衡在孕期弓形虫感染致不良妊娠结局中的重要作用。通过静脉注射Th2型细胞因子IL-10来纠正弓形虫感染所造成的Th1/Th2平衡紊乱，可有效改善孕期弓形虫感染所致的不良妊娠结局。该方法有望应用于改善孕期弓形虫感染致不良妊娠结局，降低先天性弓形虫病的发生，具有重要的理论意义和较好的临床应用前景。

3. 主要技术性能指标： （1）该项目通过建立C57BL/6小鼠早孕期弓形虫感染动物模型，研究发现用IL-10治疗能显著改善弓形虫感染所造成的不良妊娠结局，使流产率下降27%左右。 （2）该项目通过检测胎盘局部NKG2A和Qa-1阳性细胞率及NKG2A和Qa-1的mRNA水平，发现IL-10对不良妊娠结局的改善作用的机制之一可能是通过上调母胎界面蜕膜NK细胞表面抑制性受体NKG2A及其配体滋养层细胞表面Qa-1的表达。 （3）该项目通过检测胎盘局部细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平，发现IL-10对不良妊娠结局的改善作用的另一机制可能是通过纠正弓形虫感染后母胎界面Th1/Th2细胞因子的失衡状态。 （4）该项目通过弓形虫体外感染人滋养层细胞和人胎盘滋养层细胞系BeWo细胞，发现IL-10对弓形虫感染的滋养层细胞表面的HLA-G表达有上调作用，同时可下调滋养层细胞的凋亡率达20%左右，有利于不良妊娠结局的改善。 （5）IL-10对弓形虫感染所致的不良妊娠结局有较好的改善作用。

4. 与国内外同类技术比较： 国内外研究已发现，母胎界面Th1/Th2平衡状态在维持正常妊娠中发挥非常重要的作用，并证实反复习惯性流产、先兆子痫等不良妊娠结局的发生与母胎界面Th1/Th2平衡状态失衡有关。但有关母胎界面Th1/Th2平衡在孕期弓形虫感染致不良妊娠结局发生中的作用机制仍未见报道，尤其是通过调节母胎界面Th1/Th2平衡是否能降低或减少弓形虫感染所造成的不良妊娠结局的发生也未见报道。本研究对其进行了深入探讨，首次证实孕期弓形虫感染后可打破母胎界面Th1/Th2平衡状态，从而造成不良妊娠结局的发生。通过IL-10注射纠正Th1/Th2平衡状态，IL-10可以影响弓形虫感染后所致的各项指标向有利于妊娠的方向逆转，并显著改善了孕期弓形虫感染小鼠所致的不良妊娠结局。本研究为孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的机制研究及寻找改善孕期弓形虫感染所致不良妊娠结局的途径和手段提供了新的研究思路。

5. 创新性及其作用意义： 孕期弓形虫感染能通过母婴垂直传播，引起无脑儿、脑积水、智力发育障碍、弓形虫眼病、弓形虫肝炎等先天性弓形虫病的发生。我国每年可能有8～10万名婴儿因先天性弓形虫感染而造成出生缺陷，严重影响着我国的人口出生质量。但孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子机制仍不清楚，且尚未发现有效的预防和治疗弓形虫感染所致不良妊娠结局的手段和方法。本项目广泛吸取国际上最先进的生殖免疫学的理论和观点，从维持正常妊娠起关键作用的Th1/Th2平衡入手，首次证实孕期弓形虫感染后可打破母胎界面Th1/Th2平衡状态，从而造成不良妊娠结局的发生。通过IL-10注射纠正Th1/Th2平衡状态的方法可显著改善孕期弓形虫感染所致的不良妊娠结局。本研究结果有望成为一种切实、可靠的预防弓形虫感染致不良妊娠结局的有效方法和手段，为预防先天性弓形虫病的发生和不良妊娠结局的改善奠定坚实的理论基础，从而降低出生缺陷，提高出生人口的质量。

1.任务来源： 本课题为2009年烟台市科技发展计划项目（项目编号：2010172）。 2.应用领域和技术原理： 本课题通过建立早孕期弓形虫感染动物模型和体外感染分离纯化的人滋养层细胞,检测弓形虫感染后母胎界面Th1/Th2平衡状态,证实了母胎界面Th1/Th2平衡在孕期弓形虫感染致不良妊娠结局中的发挥致关重要的作用,通过静脉注射Th2型细胞因子IL-10来纠正引弓形虫感染所造成的Th1/Th2平衡紊乱,可有效改善孕期弓形虫感染所致的不良妊娠结局,该方法有望应用于改善孕期弓形虫感染致不良妊娠结局,降低先天性弓形虫病的发生,具有重要的理论意义和较好的临床应用前景。 3.主要技术性能指标： （1）该项目通过建立C57BL/6小鼠早孕期弓形虫感染动物模型,研究发现用IL-10治疗能显著改善弓形虫感染所造成的不良妊娠结局,使流产率下降27%左右。 （2）该项目通过检测胎盘局部NKG2A和Qa-1阳性细胞率及NKG2A和Qa-1的mRNA水平,发现IL-10对不良妊娠结局的改善作用的机制之一可能是通过上调母胎界面蜕膜NK细胞表面抑制性受体NKG2A及其配体滋养层细胞表面Qa-1的表达。 （3）该项目通过检测胎盘局部细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平,发现IL-10对不良妊娠结局的改善作用的另一机制可能是通过纠正弓形虫感染后母胎界面Th1/Th2细胞因子的失衡状态。 （4）该项目通过弓形虫体外感染人滋养层细胞和人胎盘滋养层细胞系BeWo细胞,发现IL-10对弓形虫感染的滋养层细胞表面的HLA-G表达有上调作用,同时可下调滋养层细胞的凋亡率达20%左右,有利于不良妊娠结局的改善。 （5）IL-10对弓形虫感染所致的不良妊娠结局有较好的改善作用。 4.与国内外同类技术比较： 国内外研究已发现,母胎界面Th1/Th2平衡状态在维持正常妊娠中发挥非常重要的作用,并证实反复习惯性流产、先兆子痫等不良妊娠结局的发生与母胎界面Th1/Th2平衡状态失衡有关,但有关母胎界面Th1/Th2平衡在孕期弓形虫感染致不良妊娠结局发生中的作用机制仍未见报道,尤其是通过调节母胎界面Th1/Th2平衡是否能降低或减少弓形虫感染所造成的不良妊娠结局的发生也未见报道。本研究对其进行了深入探讨,首次证实孕期弓形虫感染后可打破母胎界面Th1/Th2平衡状态,从而造成不良妊娠结局的发生,通过IL-10注射纠正Th1/Th2平衡状态,IL-10可以影响弓形虫感染后所致的各项指标向有利于妊娠的方向逆转,并显著改善了孕期弓形虫感染小鼠所致的不良妊娠结局。本研究为孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的机制研究及寻找改善孕期弓形虫感染所致不良妊娠结局的途径和手段提供了新的研究思路。 5.创新性及其作用意义： 孕期弓形虫感染能通过母婴垂直传播,引起无脑儿、脑积水、智力发育障碍、弓形虫眼病、弓形虫肝炎等先天性弓形虫病的发生。我国每年可能有8～10万名婴儿因先天性弓形虫感染而造成出生缺陷,严重影响着我国的人口出生质量。但孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子机制仍不清楚,且尚未发现有效的预防和治疗弓形虫感染所致不良妊娠结局的手段和方法。本项目广泛吸取国际上最先进的生殖免疫学的理论和观点,从维持正常妊娠起关键作用的Th1/Th2平衡入手,首次证实孕期弓形虫感染后可打破母胎界面Th1/Th2平衡状态,从而造成不良妊娠结局的发生,通过IL-10注射纠正Th1/Th2平衡状态的方法可显著改善了孕期弓形虫感染所致的不良妊娠结局。本研究结果有望成为一种切实、可靠的预防弓形虫感染致不良妊娠结局的有效方法和手段,为预防先天性弓形虫病的发生和不良妊娠结局的改善奠定坚实的理论基础,从而降低出生缺陷,提高出生人口的质量。