一种差向异构酶的突变体及其应用

本发明提供了一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体构建及其应用的方法。

该方法包括以下步骤：

1. 以来自于球形节杆菌（Arthrobacter globiformis）的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因为亲本；
2. 通过同源比对及定点突变技术，将酶活性催化中心的第105位氨基酸残基缬氨酸变成异亮氨酸；
3. 构建表达载体；
4. 以E.coli BL21（DE3）为异源表达宿主，获得酶的突变体。

活性测定表明，得到的突变体酶温度稳定性显著提高。在60℃和70℃下的t1/2值分别达到了12.5小时和0.5小时，70℃下的半衰期较野生型延长6倍。突变体酶的活性也得到提高。

本发明筛选获得的突变体酶，可以在高温下更高效地催化D-果糖异构化为D-阿洛酮糖，为工业化生产D-阿洛酮糖提供了广阔的前景，具有重要的工业应用价值。

本发明提供了一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体构建及其应用的方法，酶的突变体的构建方法为：以来自于球形节杆菌（Arthrobacter globiformis）的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因为亲本，通过同源比对及定点突变技术将酶活性催化中心的（第105位氨基酸残基）缬氨酸变成异亮氨酸；之后构建表达载体，以E.coli BL21（DE3）为异源表达宿主获得酶的突变体。

活性测定表明得到的突变体酶温度稳定性显著提高。60℃和70℃下的t1/2值分别达到了12.5h和0.5h，70℃下的半衰期较野生型延长6倍。突变体酶的活性也得到提高。

本发明筛选获得的突变体酶可以在高温下更高效地催化D-果糖异构化为D-阿洛酮糖，为工业化生产D-阿洛酮糖提供了广阔的前景，具有重要的工业应用价值。