一种含有D型氨基酸的双羰基还原酶的突变体的制备方法

本发明公开了一种制备含D型赖氨酸的蛋白质和多肽的方法：

1. 在表达性质粒的特定酶切多克隆位点引入了目的蛋白的表达基因，并且将所述表达基因的目的位点突变成为TAG密码子；
2. 在该表达性质粒的另一个特定酶切多克隆位点引入ph氨酰tRNA合成酶的序列，得到重组质粒；
3. 制备pAC-ph△-AK3质粒；
4. 由pAC-ph△-AK3质粒和重组质粒共转染到宿主中，得到表达系统；
5. 在培养基中添加D型赖氨酸，诱导上述表达系统表达目的蛋白，纯化得到目的蛋白。

利用来源于Pyrococcus horikoshii的赖氨酰tRNA合成酶、抑制型tRNA分子对对D型赖氨酸能专一选择琥珀密码子TAG的特性，在双羰基还原酶中定点引入D型赖氨酸，引入效率接近100%，具有广泛的应用价值。

本发明公开了一种制备含D型赖氨酸的蛋白质和多肽的方法：在表达性质粒的特定酶切多克隆位点引入了目的蛋白的表达基因，并且将所述表达基因的目的位点突变成为TAG密码子；在该表达性质粒的另一个特定酶切多克隆位点引入ph氨酰tRNA合成酶的序列，得到重组质粒；制备pAC-ph△-AK3质粒；由pAC-ph△-AK3质粒和重组质粒共转染到宿主中，得到表达系统；在培养基中添加D型赖氨酸，诱导上述表达系统表达目的蛋白，纯化得到目的蛋白。利用来源于Pyrococcushorikoshii的赖氨酰tRNA合成酶、抑制型tRNA分子对对D型赖氨酸能专一选择琥珀密码子TAG的特性在双羰基还原酶中定点引入D型赖氨酸，引入效率接近100%，具有广泛的应用价值。