重要植物病原生物分子检测技术研究与应用

　　本研究根据生物的核糖体基因的转录间隔区的DNA序列在种内不同个体之间具有高度保守性、而种间差异较大及不同物种间线粒体DNA序列的差异等原理，测定或从GenBank中获取大豆疫霉、黑白轮枝菌、小麦印度腥黑穗病菌、梨火疫病菌和玉米细菌性枯萎病菌等五种重要外来入侵病原菌及其相似种或近缘种的ITS序列。利用分子生物学软件对ITS序列进行比较，根据差异较大的区域设计了具有自己知识产权的特异性PCR引物。

在验证这些PCR引物特异性的基础上，建立了这些检疫性病原菌的分子检测技术，并组装成五个检测试剂盒，申请3个国家发明专利。首次报道了从土壤中富集大豆疫霉卵抱子方法，并使用微(NH2)4SO4可提高PCR的灵敏度。应用免疫吸附PCR技术提高了检测植物病原细菌的灵敏度。

上述五种重要检疫性植物病原菌分子检测技术快速、准确、灵敏，其中大豆疫霉检测灵敏度达到0.2个卵孢子/克土样、可达到1个游动孢子；小麦印度腥黑穗病菌检测灵敏度达到1个冬孢子；黑白轮枝菌检测灵敏度达到0.2pgDNA。研制的检测试剂盒已分别在南京、秦州和张家港等地的出入境检验检疫局成功地进行了验证和应用，可望在植物检疫部门推广应用。

本技术成果技术路线先进，检测结果可靠，对提高我国进境植物及产品中危险性病原生物的检测水平具有重要意义，在国内外同类研究中达到先进水平。

本研究根据生物的核糖体基因的转录间隔区的DNA序列在种内不同个体之间具有高度保守性、而种间差异较大及不同物种间线粒体DNA序列的差异等原理，测定或从GenBank中获取大豆疫霉、黑白轮枝菌、小麦印度腥黑穗病菌、梨火疫病菌和玉米细菌性枯萎病菌等五种重要外来入侵病原菌及其相似种或近缘种的ITS序列，利用分子生物学软件对ITS序列进行比较，根据差异较大的区域设计了具有自己知识产权的特异性PCR引物，在验证这些PCR引物特异性的墓础上，建立了这些检疫性病原菌的分子检测技术并组装成五个检测试剂盒，申请3个国家发明专利。首次报道了从土壤中富集大豆疫霉卵抱子方法和使用微(NH2)4SO4可提高PCR的灵敏度，应用免疫吸附PCR技术提高了检测植物病原细菌的灵敏度。上述五种重要检疫性植物病原菌分子检测技术快速、准确、灵敏，其中大豆疫霉检测灵敏度达到0.2个卵孢子／克土样、可达到1个游动孢子；小麦印度腥黑穗病菌检测灵敏度达到1个冬孢子；黑白轮枝菌检测灵敏度达到0.2pgDNA；研制的检测试剂盒已分别在南京、秦州和张家港等地的出入境检验检疫局成功地进行了验证和应用，可望在植物检疫部门推广应用。 本技术成果技术路线先进，检测结果可靠，对提高我国进境植物及产品中危险性病原生物的检测水平具有重要意义，在国内外同类研究中达到先进水平。