一株高效表达类人胶原蛋白的ptsG基因敲除重组菌及其构建方法和蛋白表达

摘要： 本发明涉及一株高效表达类人胶原蛋白的ptsG基因敲除重组菌及其构建方法和蛋白表达。在利用大肠杆菌发酵生产类人胶原蛋白的过程中，乙酸积累会对菌体生长及蛋白表达造成影响。而现有减少乙酸副产物的方法往往会导致胶原蛋白产量的降低。本发明采用以下步骤进行优化：

1. 以保藏编号为CGMCCNo.0743的大肠杆菌BL21为出发菌；
2. 采用Red同源重组技术，用安普霉素抗性基因替换大肠杆菌基因组上的ptsG基因；
3. 通过质粒pCP20表达的FLP内切酶消除安普霉素抗性基因；
4. 最终得到敲除ptsG基因的大肠杆菌工程菌CGMCCNo.7331。

此外，本发明通过基因工程手段对大肠杆菌葡萄糖吸收途径进行改造，从而减少乙酸积累，提高类人胶原蛋白的积累。具体表现在以下方面：

• 葡萄糖的消耗量减少9%-28%；
• 类人胶原蛋白的产量可提高20%-30%。

通过以上优化，有效提高了类人胶原蛋白的生产效率和产品质量。

摘要：本发明涉及一株高效表达类人胶原蛋白的ptsG基因敲除重组菌及其构建方法和蛋白表达。利用大肠杆菌发酵生产类人胶原蛋白时，乙酸积累会影响菌体生长及蛋白表达，而现有减少乙酸副产物的方法会降低胶原蛋白产量。本发明以保藏编号为CGMCCNo.0743的大肠杆菌BL21为出发菌，采用Red同源重组，用安普霉素抗性基因替换大肠杆菌基因组上的ptsG基因，然后通过质粒pCP20表达的FLP内切酶消除安普霉素抗性基因，得到敲除ptsG基因的大肠杆菌工程菌CGMCCNo.7331。本发明通过基因工程手段改造大肠杆菌葡萄糖吸收途径，减少乙酸积累，提高类人胶原蛋白的积累，葡萄糖的消耗量减少9%-28%，类人胶原蛋白的产量可提高20%-30%。