应用AP-PCR进行真菌抑菌试验前后的实验研究

该课题任务来源于吉林省中医药管理局资助课题，编号为吉中医0238。课题实验设计从分子生物学角度研究复方苦槿霜的抑菌作用机理，旨在为开发提供一种安全、有效、价格低廉的治疗皮肤浅部真菌病的中药外用制剂，奠定理论基础。

前期工作（2000年省中医药管理局课题）已完成了复方苦槿霜的制备、抑菌试验、药效学试验及临床观察。结论：复方苦槿霜的抑菌作用与达克宁相当，且有消炎抗渗出作用，并对深部真菌也有抑制作用。毒理学研究表明：无刺激性及过敏反应。各脏器病理检查亦未见药物损害性病理改变。

改型前后药物的临床观察比较，液剂与霜剂作用相当，二者与达克宁作用相当。

该课题进一步用AP-PCR鉴定真菌菌株，观察抑菌前后DNA带型的改变情况，以证实复方苦槿霜的作用机理。结论：

1. 真菌抑菌前后DNA带型无改变。光学显微镜下放大1000倍观察，用药组菌丝体外形粗糙，变形大分生孢子变小；电镜观察：细胞膜皱缩，胞浆中大部分被电子薄区占据，细胞器消失。因此，复方苦槿霜的作用机理是引起细胞膜的皱缩和细胞器的消失而达到抑菌的目的。

2. 根据“达克宁”抑菌机理的资料阐述，主要是通过抑制真菌麦角甾醇的生物合成，影响细胞膜的通透性，而起到抑菌作用。结果表明：二者的作用机理不同，但都起到了同样的抑菌效果。

综上所述，该课题的创新点如下：

1. 虽有中药治疗皮肤浅部真菌病的报道，但只限于中药临床观察治疗，而对其药理、药效、毒理的研究及该课题所完成的从分子生物学角度应用AP-PCR技术鉴定真菌抑菌前后DNA带型变化的研究尚未见报道。

2. 目前对皮肤浅部真菌病的治疗国内外均以复方达克宁霜、孚其乳膏、盐酸特比萘芬凝胶等西药外涂，但该类药物价格昂贵，副作用大，停药后易复发，治疗多不彻底。而复方苦槿霜经临床观察及抑菌试验证实虽与达克宁组作用相当，但该霜剂安全、有效、愈后不易复发，经临床观察及急、慢性毒性试验证实未见明显毒副反应，且药源广，价格低，工艺简单，易生产。

3. 抑菌试验结果：复方苦槿霜对红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、絮状表皮癣菌、犬小孢子癣菌、白色念珠菌均有显著抑制作用；10%复方苦槿霜与达克宁作用相当，并对深部真菌都有抑制作用。

4. 药效学试验：复方苦槿霜的安全性、药效学及急、慢性毒性实验结果表明，无皮肤刺激及过敏反应，无明显毒副作用。

5. 从分子生物学角度，用多种真菌的分子生物学鉴定方法任意引物聚合酶链反应（AP-PCR）鉴定皮肤浅部真菌菌型，观察该霜剂抑菌前后DNA带型的改变情况，结果表明复方苦槿霜作用机理引起细胞膜皱缩，细胞器消失；达克宁是通过抑制真菌麦角甾醇的生物合成，影响细胞膜的通透性；虽二者作用机理不同，但抑菌效果相同。

该课题任务来源于吉林省中医药管理局资助课题：编号为吉中医0238。该课题实验设计即从分子生物学角度研究复方苦槿霜的抑菌作用机理，旨在为开发提供一种安全，有效，价格低廉的治疗皮肤浅部真菌病的中药外用制剂，奠定理论基础。前期工作（2000年省中医药管理局课题）已完成了复方苦槿霜的制备，抑菌试验，药效学试验及临床观察。结论：复方苦槿霜的抑菌作用与达克宁相当，且有消炎抗渗出作用，并对深部真菌也有抑制作用。毒理学研究表明：无刺激性及过敏反应。各脏器病理检查亦未见药物损害性病理改变。改型前后药物的临床观察比较，液剂与霜剂作用相当，二者与达克宁作用相当。该课题进一步用AP-PCR鉴定真菌菌株，观察抑菌前后DNA带型的改变情况，以证实复方苦槿霜的作用机理。结论：1.真菌抑菌前后DNA带型无改变，光学显微镜下放大1000倍观察，用药组菌丝体外形粗糙，变形大分生孢子变小；电镜观察：细胞膜皱缩，胞浆中大部分被电子薄区占据，细胞器消失。因此，复方苦槿霜的作用机理是引起细胞膜的皱缩和细胞器的消失而达到抑菌的目的；2.根据资料阐述“达克宁”抑菌机理，主要是通过抑制真菌麦角甾醇的生物合成，影响细胞膜的通透性，而起到抑菌作用。结果表明：二者的作用机理不同，但都起到了同样的抑菌效果。综上所述，该课题的创新点如下：1、虽有中药治疗皮肤浅部真菌病的报道，但只限于中药临床观察治疗，而对其药理、药效、毒理的研究及该课题所完成的从分子生物学角度应用AP-PCR技术鉴定真菌抑菌前后DNA带型变化的研究尚未见报道。2、目前对皮肤浅部真菌病的治疗国内外均以复方达克宁霜、孚其乳膏、盐酸特比萘芬凝胶等西药外涂，但该类药物价格昂贵，副作用大，停药后易复发，治疗多不彻底。而复方苦槿霜经临床观察及抑菌试验证实虽与达克宁组作用相当，但该霜剂安全、有效、愈后不易复发，经临床观察及急、慢性毒性试验证实未见明显毒副反应，且药源广，价格低，工艺简单，易生产。3、抑菌试验结果：复方苦槿霜对红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、絮状表皮癣菌、犬小孢子癣菌、白色念珠菌均有显著抑制作用；10%复方苦槿霜与达克宁作用相当，并对深部真菌都有抑制作用。4、药效学试验：复方苦槿霜的安全性、药效学及急、慢性毒性实验结果表明，无皮肤刺激及过敏反应，无明显毒副作用。5、从分子生物学角度，用多种真菌的分子生物学鉴定方法任意引物聚合酶链反应（AP-PCR）鉴定皮肤浅部真菌菌型，观察该霜剂抑菌前后DNA带型的改变情况，结果表明复方苦槿霜作用机理引起细胞膜皱缩，细胞器消失；达克宁是通过抑制真菌麦角甾醇的生物合成，影响细胞膜的通透性；虽二者作用机理不同，但抑菌效果相同。