一株基因工程构建发酵生产苹果酸的重组黑曲霉菌株及应用

本发明公开了一株基因工程构建的发酵生产苹果酸的重组黑曲霉菌株及其应用。

该菌株是以黑曲霉CGMCC No.10142为出发菌株，经基因工程构建而成，命名为CGMCC No.12479。其构建方法如下：

1. 将原始黑曲霉的TCA循环中的柠檬酸合酶cs和高柠檬酸合酶hcs基因进行敲除，以降低柠檬酸产量。

2. 将草酰乙酸水解酶oahA进行敲除，以减少草酸的形成。

3. 同时将原始黑曲霉的四碳二羧酸转运蛋白dct基因、米曲霉CGMCC No.3042的苹果酸转运蛋白C4T318基因以及丙酮酸羧化酶pc基因整合到黑曲霉基因组上，得到重组黑曲霉菌株。

该重组黑曲霉菌株具有发酵积累大量苹果酸的能力，并且杂酸含量较少。与现有菌株相比，其苹果酸产量有较大幅度的提高。

综上所述，本发明提供了一种发酵生产苹果酸的新方法，具有较高的实用价值。

本发明公开了一株基因工程构建发酵生产苹果酸的重组黑曲霉菌株及应用。

它是以黑曲霉CGMCC No.10142为出发菌株，经基因工程构建一株发酵高产苹果酸产量的黑曲霉菌株CGMCC No.12479。

将原始黑曲霉的TCA循环中的柠檬酸合酶cs和高柠檬酸合酶hcs基因进行敲除，降低柠檬酸产量。

将草酰乙酸水解酶oahA进行敲除，减少草酸的形成。

同时将原始黑曲霉四碳二羧酸转运蛋白dct基因和米曲霉CGMCC No.3042苹果酸转运蛋白C4T318基因和丙酮酸羧化酶pc基因整合到黑曲霉基因组上得到重组黑曲霉菌株，能够发酵积累大量苹果酸。

本发明获得的黑曲霉菌株具有生产苹果酸的能力并且杂酸比较少，产量比现有菌株有较大幅度的提高。