一种绵羊肺炎支原体Hsp70(DnaK)C末端基因重组质粒的构成方法如下:
首先,设计并合成以下引物: - P2: GGGGTCGACTTAATTTTGTTTGATTTC - P3: CAGGGATCCACTCCTTTAACTTTAGG
接着,以质粒T-Hsp70为模板,利用上述引物P2和P3进行PCR扩增,得到Hsp70C末端基因cDNA片段。该片段大小约为700bp。
然后,将该片段与pET28a(+)载体相连接,获得重组质粒pET28a(+)-Hsp70C。
进一步,将重组质粒转化至BL21(DE3)菌中。
最后,对表达产物进行SDS-PAGE分析,得到大小约为29kDa的目的蛋白。
| 专利名称 | 绵羊肺炎支原体Hsp70(DnaK)C末端基因重组质粒 | ||
|---|---|---|---|
| 专利状态 | - | 专利号(申请号) | CN201110098141.8 |
| 申请号 | - | 专利申请日期 | 2011-04-19 |
| 专利授权日期 | 2014-03-26 | 专利权届满日 | - |
| 专利所属地 | 中国 | 专利类型 | 发明专利 |
| 发明人 | 王玉炯;李敏;谢琴;刘晓明;马春骥;徐庆春 | ||
| 权利人 | - | ||
| 专利摘要 | 一种绵羊肺炎支原体Hsp70(DnaK)C末端基因重组质粒,其构成方法为:首先设计并合成如下引物:P2:GGGGTCGACTTAATTTTGTTTGATTTC;P3:CAGGGATCCACTCCTTTAACTTTAGG,再以质粒T-Hsp70为模板,利用上述引物P2、P3进行PCR扩增,得到Hsp70C末端基因cDNA片段,片段大小约为700bp,将该片段与pET28a(+)相连接,获得重组质粒pET28a(+)-Hsp70C,进一步将重组质粒转化至BL21(DE3)中,并对表达产物进行SDS-PAGE,得到大小约为29kDa的目的蛋白。 | ||