狗肿瘤坏死因子14基因和蛋白质制备及应用

狗肿瘤坏死因子14（TNFSF14/LIGHT）基因和蛋白质制备及应用，涉及生物基因工程领域。

狗肿瘤坏死因子14具有SEQ ID NO.1所示的序列。其克隆方法如下：

1. 采用TRIzol法提取狗脾脏总RNA，并进行逆转录。
2. 根据狗基因组序列，使用嵌套引物进行两次PCR扩增，获得723bp的扩增片段。
3. 对扩增片段进行测序，确认其为狗肿瘤坏死因子LIGHT的全长序列。

将胞外可溶段连接到pET43.1a原核质粒中，并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。表达后，通过Ni+-NTA柱纯化，得到重组蛋白His6-dsLIGHT。

所述的狗肿瘤坏死因子14（LIGHT）的cDNA可通过现有的基因工程方法生产重组dLIGHT，用于进一步的研究。

狗肿瘤坏死因子14(TNFSF14/LIGHT)基因和蛋白质制备及应用，涉及生物基因工程领域。狗肿瘤坏死因子14具有SEQ ID NO.1所示的序列。其克隆方法如下：TRIzol法提取狗脾脏总RNA并进行逆转录；根据狗基因组序列涉及嵌套引物进行两次PCR扩增，获得723bp的扩增片段，经测序为狗肿瘤坏死因子LIGHT的全长序列。将胞外可溶段连接到pET43.1a 原核质粒中并转到大肠杆菌BL21(DE3)中表达，Ni+-NTA柱纯化后得到的重组蛋白His6-dsLIGHT。所述的狗肿瘤坏死因子14(LIGHT)的cDNA可通过现有的基因工程的方法，生产重组dLIGHT，用于进一步的研究。