桦和孔菌子实体抗糖尿病活性成分分离及产品开发

经过课题组成员三年半时间的努力，完成了合同书规定的各项要求。

1. 确定了桦褐孔菌降血糖活性部位：采用分部提取方法和体外α-糖苷酶体外抑制活性筛选，确定了桦褐孔菌子实体多糖为桦褐孔菌有效降血糖部位。

2. 建立了桦褐孔菌粗多糖提取和分离纯化工艺：采用单因素和正交试验确定了桦褐孔菌粗多糖的提取工艺，采用分级醇沉和离子交换树脂脱蛋白分离得到了“桦褐孔菌纯化多糖”，凝胶层析得到了桦褐孔菌PBF2单组份。体外活性和体内活性研究表明：桦褐孔菌PBF2单组份＞桦褐孔菌纯化多糖＞桦褐孔菌粗多糖，且桦褐孔菌纯化多糖对正常大鼠血糖值无显著影响。结构分析表明，桦褐孔菌高活性多糖单组分PBF2为一新型的杂多糖。

3. 开发生产了桦褐孔菌粗多糖和纯化多糖两个降血糖提取物产品，建立了活性成分检测方法并进行了质量控制。在小试实验基础之上，中试生产了“桦褐孔菌粗多糖”和“桦褐孔菌纯化多糖”两个降血糖提取物产品，通过凝胶HPLC分析确定了PBF2组分的检测方法，并在生产时进行了质量控制。

技术创新点或者解决重大关键共性技术和解决社会经济发展中重大问题：

虽然在项目实施过程中，也有文献报道了桦褐孔菌提取物的体外抑制α-糖苷酶和体内（动物实验）降血糖功效，但普遍以桦褐孔菌的水或醇的粗提取物为主，没有明确具体的降血糖活性成分。主要创新点如下：

① 建立了分级醇沉和离子交换脱蛋白分离“桦褐孔菌纯化多糖”的小试和中试生产工艺；桦褐孔菌纯化多糖体外对α-葡萄糖苷酶的IC50值为8μg/mL，动物实验活性高于阳性对照阿卡波糖，其中活性单组分PBF2的含量占33.2%。

② 桦褐孔菌高降血糖活性单组分的结构鉴定。PBF2主链由1,6连接的葡萄糖组成，在3,6)--D-Glcp-(1的3位产生支链，-L-Fucp位于-1,3,6-Glcp的3位上。端基由Glcp组成，同时还含有少量的(1,3,6)--D-甘露糖残基。

发明专利与获国家及省部级奖名称、获批准的国际及国家标准名称等。该项目实施过程中申请国家发明专利1项：

1. 一种水溶性α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取方法，发明专利，申请号：201010574409.6。

经过课题组成员三年半时间的努力，完成了合同书规定的各项要求。1、确定了桦褐孔菌降血糖活性部位：采用分部提取方法和体外α-糖苷酶体外抑制活性筛选确定了桦褐孔菌子实体多糖为桦褐孔菌有效降血糖部位。2、建立了桦褐孔菌粗多糖提取和分离纯化工艺：采用单因素和正交试验确定了桦褐孔菌粗多糖的提取工艺，采用分级醇沉和离子交换树脂脱蛋白分离得到了“桦褐孔菌纯化多糖”，凝胶层析得到了桦褐孔菌PBF2单组份，体外活性和体内活性研究表明：桦褐孔菌PBF2单组份＞桦褐孔菌纯化多糖＞桦褐孔菌粗多糖，且桦褐孔菌纯化多糖对正常大鼠血糖值无显著影响。结构分析表明桦褐孔菌高活性多糖单组分PBF2为一新型的杂多糖。3、开发生产了桦褐孔菌粗多糖和纯化多糖两个降血糖提取物产品，建立了活性成分检测方法并进行了质量控制在小试实验基础之上，中试生产了“桦褐孔菌粗多糖”和“桦褐孔菌纯化多糖”两个降血糖提取物产品，通过凝胶HPLC分析确定了PBF2组分的检测方法，并在生产时进行了质量控制。技术创新点或者解决重大关键共性技术和解决社会经济发展中重大问题：虽然在项目实施过程中，也有文献报道了桦褐孔菌提取物的体外抑制α-糖苷酶和体内(动物实验)降血糖功效，但普遍以桦褐孔菌的水或醇的粗提取物为主，没有明确具体的降血糖活性成分。主要创新点如下：①建立了分级醇沉和离子交换脱蛋白分离“桦褐孔菌纯化多糖”的小试和中试生产工艺；桦和孔菌纯化多糖体外对α-葡萄糖苷酶的IC50值为8μg/mL，动物实验活性高于阳性对照阿卡波糖，其中活性单组分PBF2的含量占33.2%，②桦褐孔菌高降血糖活性单组分的结构鉴定。PBF2主链由1,6连接的葡萄糖组成，在3,6)--D-Glcp-(1的3位产生支链，-L-Fucp位于-1,3,6-Glcp的3位上。端基由Glcp组成，同时还含有少量的(1,3,6)--D-甘露糖残基。发明专利与获国家及省部级奖名称、获批准的国际及国家标准名称等。该项目实施过程中申请国家发明专利1项：1、一种水溶性α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取方法，发明专利，申请号：201010574409.6。