基于IFT-27的儿童肥胖症早期快检试剂盒

肥胖被称为21世纪头号健康杀手，严重威胁到人类健康。关于肥胖症的研究已经成为热点，大众对肥胖症的重视程度也是如火如荼。

遗传因素对肥胖的影响 研究发现，遗传对肥胖的影响巨大，约占40%--60%。也就是说，一半左右的肥胖症都是由遗传因素所决定的。IFT27具有调节食欲和能量代谢功能的作用。2014年，有关ift27的研究指出，其表达量高低与纤毛病的表征有密切关系，科学性得到证实。

实验方法和结果 在本课题中，构建了一套原核融合表达载体，将其转化到大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导后，表达His-IFT27融合蛋白。通过亲和纯化得到的His-IFT27作为抗原来免疫新西兰大白兔。采用间接ELISA方法对其进行效价测定。经过四次免疫后，效价达到128000以上。将得到的抗血清首先进行ProteinA亲和纯化，接着利用另一标签抗原His-IFT27融合蛋白对其进行膜纯化。通过免疫印迹检测莱茵衣藻中的IFT27，结果表明制备的多克隆抗体特异性较好。通过检测正常人体中IFT27表达量的高低，确定早期肥胖症的检出标准。

试剂盒的制备和组装 通过方阵滴定进行样品稀释度的确定、血清作用时间的确定、底物液作用时间的确定等实验，确定最佳抗原和多抗稀释度。将试剂盒内组分（抗原、多抗、稀释液、强阳性对照、弱阳性对照、阴性对照、去离子水、包被液、底物液、终止液）最终确定与组装，编写试剂盒说明书。

肥胖被称为21世纪头号健康杀手，严重威胁到人类健康，关于肥胖症的研究已经成为热点，大众关于肥胖症的重视程度也是如火如荼。

遗传因素对肥胖的影响

研究发现遗传对肥胖的影响巨大，约占40%--60%，也就是说，一半左右的肥胖症都是由遗传因素所决定的。IFT27具有调节食欲和能量代谢功能的作用，2014年，有关ift27的研究指出其表达量高低与纤毛病的表征有密切关系，科学性得到证实。

实验方法和结果

在本课题中构建了一套原核融合表达载体，将其转化到大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导后表达His-IFT27融合蛋白。将通过亲和纯化得到的His-IFT27作为抗原来免疫新西兰大白兔。采用间接ELISA方法对其进行进行效价测定。经过四次免疫后效价达到128000以上。将得到的抗血清首先进行ProteinA亲和纯化，接着利用另一标签抗原His-IFT27融合蛋白对其进行膜纯化。通过免疫印迹检测莱茵衣藻中的IFT27，结果表明制备的多克隆抗体特异性较好，通过检测正常人体中IFT27表达量的高低确定早期肥胖症的检出标准。

试剂盒的制备和组装

通过方阵滴定进行样品稀释度的确定、血清作用时间的确定、底物液作用时间的确定等实验确定最佳抗原和多抗稀释度。将试剂盒内组分（抗原、多抗、稀释液、强阳性对照、弱阳性对照、阴性对照、去离子水、包被液、底物液、终止液）最终确定与组装，编写试剂盒说明书。