利用RT-PCR技术,通过同源克隆策略及预测序列的分析,成功从斑马鱼B的脾脏组织总RNA中克隆到了斑马鱼的B淋巴刺激因子(Ztnfsf13b)和增殖诱导配体(Ztnfsf13)的全长cDNA。随后,向数据库提交本人克隆的cDNA序列,进行了相似性搜索及同源性分析。
分析结果显示,斑马鱼与虹鳟鱼、大西洋鲑鱼的tnfsf13b和tnfsf13的氨基酸序列相似性分别为67%和61%,其可溶部分氨基酸序列相似性约为70%。这一结果证明了鱼类动物的tnfsf13b和tnfsf13存在较高的同源性。
此外,本人克隆出的斑马鱼的B淋巴刺激因子和增殖诱导配体全长cDNA得到了证实。同时,体外活性实验进一步从功能上验证了这2个肿瘤坏死因子超家族成员。
| 专利名称 | 斑马鱼B淋巴细胞增殖诱导配体cDNA及其克隆方法和重组应用 | ||
|---|---|---|---|
| 专利状态 | - | 专利号(申请号) | 201010598274.7 |
| 申请号 | - | 专利申请日期 | 2010-12-21 |
| 专利授权日期 | - | 专利权届满日 | - |
| 专利所属地 | 中国 | 专利类型 | 发明专利 |
| 发明人 | 张双全;闵翠;梁臻宁 | ||
| 权利人 | - | ||
| 专利摘要 | 斑马鱼B淋巴细胞和增殖诱导配体(zAPRIL)cDNA及其克隆方法和重组应用,涉及生物基因工程领域。斑马鱼B淋巴细胞增殖诱导配体基因的克隆方法如下:TR提取斑马鱼脾脏总RNA并进行逆转录;通过Clustalw软件分析虹鳟鱼,大西洋鲑鱼,斑点绿河豚以及虹鳟鱼,大西洋鲑鱼,斑点叉尾鮰APRILcDNA保守区设计兼并引物进行PCR扩增,获得600bp全长cDNA。所述斑马鱼B淋巴细胞增殖诱导配体cDNA可通过现有基因工程方法,生产重组斑马鱼APRIL。 | ||