长期传代培养鸡胚胎干细胞的方法及其专用培养基

长期传代培养鸡胚胎干细胞的方法及其专用培养基如下：

1. 首先分离期胚盘明区的细胞。
2. 经机械吹打分散成单个细胞或小细胞团。
3. 接种于STO饲养层。
4. 在专用培养基及37~38℃环境下培养。
5. 每3~5天传代一次。

专用培养基的组成包括： - 条件培养液：600-900mL - 胎牛血清：50-150mL - 鸡血清：5-20mL - 非必需氨基酸混合物：5-25mL - L-谷氨酰胺：0.146-0.292g - β-巯基乙醇：6-14μL - 小鼠白血病抑制因子：1—2×10^6 IU - 碱性成纤维细胞生长因子：10-50μg - 干细胞生长因子：5-20μg

将上述成分用DMEM高糖培养基定容至1000mL，并调整pH值为7.2-7.5。

条件培养液的获得方法： - 培养BRL-3A细胞至细胞汇合。 - 收集培养细胞的上清液。 - 进行离心分离。 - 经滤膜过滤所得即为条件培养液。

与已有技术相比，本发明专利具有以下优点： - 可以实现鸡胚胎干细胞的长期传代培养。 - 细胞增殖快。 - 克隆获得率高。

长期传代培养鸡胚胎干细胞的方法及其专用培养基，其特征在于分离期胚盘明区的细胞，经机械吹打分散成单个细胞或小细胞团后，接种于STO饲养层，用上述鸡胚胎干细胞在专用培养基及37~38℃环境下培养，3~5天传代一次，专用培养基包括条件培养液600-900mL；胎牛血清50-150mL；鸡血清5-20mL；非必需氨基酸中的一种或几种混合物5-25mL；L-谷氨酰胺0.146-0.292g；β-巯基乙醇6-14μL；小鼠白血病抑制因子1—2×106IU；碱性成纤维细胞生长因子10-50μg；干细胞生长因子5-20μg，将上述成分用DMEM高糖培养基定容至1000mL，调pH值为7.2-7.5，条件培养液是这样获得的，培养BRL-3A细胞至细胞汇合后，收集培养细胞的上清液，离心分离后再经滤膜过滤所得即为条件培养液。本[发明专利]与已有技术相比，具有可以实现鸡胚胎干细胞的长期传代培养，并具有细胞增殖快、克隆获得率高的优点。