一种用于耐热菌PCR快速检测的试剂盒

一、发明创造简介

苹果汁，作为我国产量最高的果汁，其生产过程中，耐热菌即酸土环脂芽孢杆菌（Alicyclobacillus acidoterrestris）的处理是技术上的重大挑战。当前，耐热菌的检测方法存在周期长的问题，通常需要4～5天，这种检测结果的滞后性无法及时指导生产。因此，苹果汁生产急需一种快速、准确的耐热菌检测试剂盒和检测方法。

本发明公开了一种用于耐热菌PCR快速检测的试剂盒，该试剂盒包括以下成分：DNA提取试剂（含细菌裂解剂A）、PCR反应预混试剂B、反应引物试剂C、阴性品控标准品D、弱阳性品控标准品E、电泳和显色试剂F、试剂G和试剂H。试剂A用于裂解细菌并释放DNA，随后通过试剂C中的耐热菌特异DNA片段引物和试剂B中的聚合酶等成分，对样品中的DNA进行特异性扩增，浓度可达百万倍以上。经过电泳和溴化乙锭染色后，使用紫外光检测即可观察到特定分子量的DNA条带。鉴于苹果浓缩汁出口贸易中对耐热菌的严格要求“不得检出”，本发明的检测结果完全满足实际生产需求，并能实现多样品的同时检测，重复性好，有效期长。

二、创新点

1. 本试剂盒检测结果准确，操作简便，易于实现标准化。
2. 使用本试剂盒检测耐热菌，检测时间仅需10小时，与传统培养检测法的4～5天检测周期相比，大幅缩短，且检测结果能满足生产需求，并能实现多样品的同时检测。

三、发明的应用价值和市场前景

我国现有果汁厂近100家，年生产苹果浓缩汁50多万吨。耐热菌是苹果汁生产中普遍遇到的技术难题。应用本检测试剂盒，可在10小时内快速检测出苹果浓缩汁中的耐热菌，显著缩短检测时间，具有极高的应用价值和广阔的市场前景。

　一、发明创造简介

苹果汁是中国产量最高的果汁，而耐热菌即酸土环脂芽孢杆菌（Alicyclobacillusacidoterrestris），是苹果汁生产中最为棘手的技术难题。目前的耐热菌检测方法检测周期长，一般需要4～5天，检测结果的滞后性使之无法及时指导生产，所以苹果汁生产中迫切需要一种快速、准确的耐热菌检测试剂盒和检测方法。

本发明公开了一种用于耐热菌PCR快速检测的试剂盒，含有DNA提取试剂：含细菌裂解剂A，PCR反应预混试剂B和反应引物试剂C。阴性品控标准品D和弱阳性品控标准品E，电泳和显色试剂F、试剂G和试剂H。试剂A将细菌裂解，释放出细菌DNA，通过试剂C中所含的耐热菌特异DNA片断引物和试剂B中的聚合酶等成分，对样品中释放出的DNA进行特异性的扩增，浓度将达到百万倍以上，经电泳和溴化乙锭染色后，紫外光检测就可以探测到一定分子量的DNA条带，由于苹果浓缩汁出口贸易中对耐热菌的要求为"不得检出"，因此利用本发明的检测结果完全可以满足实际生产的要求，且能实现多样品的同时检测，重复性好，有效期长。

　二、创新点

1．本试剂盒检测结果准确，操作简便，并易于实现标准化。

2．使用本试剂盒检测耐热菌，检测时间仅为10小时，比传统培养检测法4～5日的检测周期大大缩短，检测结果满足生产的需求，且能实现多样品的同时检测。

三、发明的应用价值和市场前景

我国目前有果汁厂近100家，年生产苹果浓缩汁50多万吨，耐热菌是苹果汁生产中普遍遇到的技术难题。使用本检测试剂盒，能快速检测出苹果浓缩汁中的耐热菌（10小时内实现检测），大为缩短了检测时间，具有很高的应用价值和市场前景。