人工合成人肠激酶基因及其表达纯化方法

项目简介：

本发明提供了一种在大肠杆菌中高效表达人肠激酶基因及其产物的表达纯化方法。具体来说，该方法依据已报道的人肠激酶轻链的核苷酸序列，并遵循大肠杆菌偏爱密码子的使用原则，设计并合成了与人肠激酶轻链氨基酸序列一致的人肠激酶轻链的核苷酸序列。通过体外合成，在大肠杆菌中实现了高效表达，并利用亲和纯化技术获得了高活力的MBP-hEKL融合蛋白。

该方法适用于人肠激酶的大规模制备。该重组蛋白能特异性识别和切割含有肠激酶切割位点的底物，可作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白融合标签的去除，且广泛应用于生物工程制药业、基因工程、生物化学和分子生物学等领域的研究。

项目核心创新点：

本项目实现了世界上首次在大肠杆菌中的人肠激酶轻链的可溶表达，其活力高于牛肠激酶轻链在酵母表达系统中的重组表达活力。

项目详细用途：

该项目用于多肽类药物融合标签的去除。

预期效益说明：

使用该方法的成本远低于牛肠激酶，且安全性高，不存在异源蛋白污染的危险。

项目简介：本发明提供了一种能在大肠杆菌中高效表达人肠激酶基因及其产物的表达纯化方法，具体是根据已报道的人肠激酶轻链的核苷酸序列和大肠杆菌偏爱密码子的使用原则，设计编码与人肠激酶轻链氨基酸序列一致的人肠激酶轻链的核苷酸序列，进行体外合成，在大肠杆菌中得到高效表达，并利用亲和纯化得到高活力的MBP-hEKL融合蛋白。

该方法适合于人肠激酶的大规模制备。该重组蛋白能特异性识别和切割含有肠激酶切割位点的底物，能够作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白融合标签的去除，且适用于生物工程制药业、基因工程、生物化学和分子生物学等方面的研究。

项目核心创新点：世界上首次在大肠杆菌中实现了人肠激酶轻链的可溶表达且活力高于牛肠激酶轻链在酵母表达系统重组表达的活力。

项目详细用途：用于多肽类药物融合标签的去除

预期效益说明：使用成本远低于牛肠激酶，且安全性高，不存在异源蛋白污染的危险。