基于补肾利湿法对痛风性关节炎NALPs信号传导通路的调控作用研究

痛风性关节炎（GA）是一种由于尿酸盐结晶沉积于关节所致的代谢性骨关节疾病。国外研究结果表明，以炎性体为中心的NALPs在激发炎症反应机制中起着重要的调控作用。我们针对这个信号转导通路进行了深入的研究。

首先，本研究应用改良氧嗪酸钾盐和尿酸钠复合法诱发大鼠GA发生，并应用补肾利湿法中药复方对GA大鼠模型进行干预。通过观察IL-1、TNF-α、caspase-1、MMP-7、TIMP-1、TGF-β、VCAM-1、IKB、COL-3等指标的变化，探讨补肾利湿法中药复方防治GA的作用机制。

本研究采用蛋白质芯片技术探索GA中具有诊断价值的生物标记物和中药复方对GA的治疗机制。提出了将3个细胞因子—CINC-3、Orexin A和Adiponectin确立为GA诊断标记物。研究这些炎性细胞因子的功能及作用将有助于明确GA的发病机制。

其次，本研究发现尿酸钠晶体与细胞表面相互作用引发了参与GA炎症反应的各种细胞的4个信号。通过建立尿酸钠诱导的大鼠GA模型，用micro-RNA芯片筛选GA中的差异基因，微阵列分析大鼠关节滑膜组织中差异表达的miRNA。对差异表达的miRNA的可能靶标通过miRDB数据库进行了预测。首次发现三个miRNA（rno-miR-328b-3p、rno-miR-375-5p、rno-miR-299a-5p）在GA的滑膜组织中表达上调，三个（rno-miR-203a-3p、rno-miR-3085、rno-miR-19b-2-5p）下调。筛选与NALPs差异表达有最大相关性的miR-203a-3p，将是探索GA与miRNA相关遗传发病机制的关键。

第三，本研究继而通过大鼠体内和大鼠滑膜细胞体外两方面，上调miR-203a-3p其表达后检测炎性因子的变化。同时转染NALP1、NALP3、NALP6，并给予补肾利湿法中药复方干预，探讨中药复方防治大鼠GA的机制。进而深入研究NALPs家族成员在GA中作用机理。在此基础上，提出补肾利湿法中药复方能够阻断NALPs蛋白的表达，可以阻断“NALPs-caspase-1-IL-1β”GA炎症信号通路，调节GA病变所致的炎症因子分泌紊乱，减轻GA炎症反应，达到防治GA的目的。

通过本项目研究，探明补肾利湿法防治GA的药效物质基础及调控炎症因子表达的分子生物学机制，为中药防治GA提供了新的手段、方法和新的治疗靶点。

痛风性关节炎（GA）是由于尿酸盐结晶沉积于关节所致的一种代谢性骨关节疾病, 国外研究结果表明,以炎性体为中心的NALPs在激发炎症反应机制中起着重要的调控作用。我们针对这个信号转导通路进行了深入的研究。首先,本研究应用改良氧嗪酸钾盐和尿酸钠复合法诱发大鼠GA发生,应用补肾利湿法中药复方对GA大鼠模型进行干预,通过观察IL-1、TNF-α、caspase-1、MMP-7、TIMP-1、TGF-β、VCAM-1、IKB、COL-3等指标的变化,探讨补肾利湿法中药复方防治GA的作用机制;本研究采用蛋白质芯片技术探索G A的中具有诊断价值的生物标记物和中药复方对GA的治疗机制,提出了将3个细胞因子—C INC-3、Orexin A和Adiponectin确立为GA诊断标记物,研究这些炎性细胞因子的功能及作用将有助于明确GA的发病机制。其次,本研究发现尿酸钠晶体与细胞表面相互作用引发了参与GA炎症反应的各种细胞的4个信号,进而通过建立尿酸钠诱导的大鼠GA模型,用 micro- RNA芯片筛选GA中的差异基因,微阵列分析大鼠关节滑膜组织中差异表达的miRNA,对差异表达的miRNA的可能靶标通过miRDB数据库进行了预测,首次发现三个miRNA（rno-miR-328b-3p, rno-miR-375-5p, rno-miR-299a-5p）在GA的滑膜组织中表达上调,三个（ rno-miR-203a-3p, rno-miR-3085, rno-miR-19b-2-5p）下调,筛选与NALPs差异表达有最大相关性的miR-203a-3p,将是探索GA与miRNA相关遗传发病机制的关键。第三,本研究继而通过大鼠体内和大鼠滑膜细胞体外两方面,上调miR-203a-3p其表达后检测炎性因子的变化;同时转染NALP1、NALP3、NALP6,并给予补肾利湿法中药复方干预,探讨中药复方防治大鼠GA的机制,进而深入研究NALPs家族成员在GA中作用机理,在此基础上,提出补肾利湿法中药复方能够阻断NALPs蛋白的表达,可以阻断“NALPs-caspase-1-IL-1β” GA炎症信号通路,调节GA病变所致的炎症因子分泌紊乱,减轻GA炎症反应,达到防治GA 的目的。通过本项目研究,探明补肾利湿法防治GA的药效物质基础及调控炎症因子表达的分子生物学机制,为中药防治GA提供了新的手段、方法和新的治疗靶点。