丝氨酸蛋白酶抑制剂ApSerpin-FA72的发酵与制备工艺研究

丝氨酸蛋白酶抑制剂是一类蛋白质超家族，在抑制HIV成熟、灭活肿瘤细胞、防治鳞翅目和鞘翅目害虫方面发挥重要作用。大量表达丝氨酸蛋白酶抑制剂ApSerpin-FA72能为开发新型生物杀虫剂、防治茶树害虫的应用奠定基础。

该课题以丝氨酸蛋白酶抑制剂ApSerpin-FA72基因为研究对象，通过基因工程技术，转化、筛选获得的高效表达丝氨酸蛋白酶抑制剂的菌株。在此基础上，进行丝氨酸蛋白酶抑制剂ApSerpin-FA72发酵条件优化，确立其蛋白纯化制备工艺，提高丝氨酸蛋白酶抑制剂的表达量，进而开展重组ApSerpin-FA72抑杀茶尺蠖的研究。

结果表明，表达菌体在pH=8.0，Tris-HCl缓冲溶液中超声破碎，以38%的总功率（342 W）、工作5秒、停顿6秒时，可获得可溶性蛋白。镍柱亲和层析中去除平衡缓冲溶液里的咪唑，能提高蛋白结合效率。通过饱和度50%硫酸铵溶液沉淀后，能够获得目的蛋白。

盐酸胍稀释复性能很好地处理包涵体，L-Arg对TrxA-ApSerpin-FA72复性过程影响较大。重组TrxA-ApSerpin-FA72对胰蛋白酶的IC50为0.48 μmol/L，pH在7~9，温度在60℃的条件下，丝氨酸蛋白酶抑制剂活性较强。

最适发酵培养基为蚕蛹粉2 g/L、可溶性淀粉10 g/L、NaCl 10 g/L、胰蛋白胨5 g/L。茶尺蠖对不同种类的杀虫剂的取食指数相近。浓度为LC20的杀虫剂与TrxA-ApSerpin-FA72浓度LC50混合液，杀虫效果增强。

丝氨酸蛋白酶抑制剂是一类蛋白质超家族,在抑制HIV成熟、灭活肿瘤细胞、防治鳞翅目和鞘翅目害虫方面发挥重要作用,大量表达丝氨酸蛋白酶抑制剂ApSerpin-FA72能为开发新型生物杀虫剂、防治茶树害虫的应用奠定基础。该课题以丝氨酸蛋白酶抑制剂ApSerpin-FA72基因为研究对象,通过基因工程技术,转化、筛选获得的高效表达丝氨酸蛋白酶抑制剂的菌株,在此基础上进行丝氨酸蛋白酶抑制剂ApSerpin-FA72发酵条件优化,确立其蛋白纯化制备工艺,提高丝氨酸蛋白酶抑制剂的表达量,进而开展重组ApSerpin-FA72抑杀茶尺蠖的研究。结果表明表达菌体在pH=8.0,Tris-HCl缓冲溶液中超声破碎,以38 %的总功率（342 W）、工作5 s、停顿6 s时,可获得可溶性蛋白;镍柱亲和层析中去除平衡缓冲溶液里的咪唑,能提高蛋白结合效率;通过饱和度50 %硫酸铵溶液沉淀后,能够获得目的蛋白。盐酸胍稀释复性能很好地处理包涵体,L-Arg对TrxA-ApSerpin-FA72复性过程影响较大;重组TrxA-ApSerpin-FA72对胰蛋白酶的IC50为0.48 μmol/L,pH在7~9,温度在60 ℃的条件下,丝氨酸蛋白酶抑制剂活性较强;最适发酵培养基为蚕蛹粉2 g/L、可溶性淀粉10 g/L、NaCl 10 g/L、胰蛋白胨5 g/L;茶尺蠖对不同种类的杀虫剂的取食指数相近,浓度为LC20的杀虫剂与TrxA-ApSerpin-FA72浓度LC50混合液,杀虫效果增强。