磷脂酶D突变体及其在制备磷脂酸、磷脂酰丝氨酸中的应用

本发明属于酶的基因工程技术领域，具体涉及一种磷脂酶D突变体及其制备与应用。

其技术方案是：利用重组DNA技术对野生型磷脂酶D基因进行定点突变，得到活力较高的磷脂酶D基因。然后，将高活力磷脂酶D基因在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统（包括毕赤酵母游离表达系统和毕赤酵母细胞表面展示系统）中表达，得到产高活力磷脂酶D的重组菌株。

表达后，检测高活力磷脂酶D的比酶活较野生型磷脂酶D提高38%-140%。具体而言，高活力磷脂酶D在以下表达系统内的发酵酶活最高值分别为：36.8U/ml（枯草芽孢杆菌表达系统）、48.1U/ml（毕赤酵母表达系统）、140.2U/(g·细胞干重)（毕赤酵母表面展示系统）。

本发明属于酶的基因工程技术领域，具体涉及一种磷脂酶D突变体及其制备与应用。

其技术方案是利用重组DNA技术对野生型磷脂酶D基因进行定点突变，得到活力较高的磷脂酶D基因，然后将高活力磷脂酶D基因在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统（包括毕赤酵母游离表达系统和毕赤酵母细胞表面展示系统）中表达，得到产高活力磷脂酶D的重组菌株。

表达后，检测高活力磷脂酶D的比酶活较野生型磷脂酶D提高38‑140％，高活力磷脂酶D在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统、毕赤酵母表面展示系统内发酵酶活最高值分别为36.8U/ml、48.1U/ml、140.2U/（g·细胞干重）。