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一种差向异构酶的突变体及其应用
成熟度：正在研发
技术类型：发明
应用行业：制造业
技术简介
本发明提供了一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体构建及其应用的方法，酶的突变体的构建方法为：以来自于球形节杆菌（Arthrobacter globiformis）的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因为亲本，通过同源比对及定点突变技术将酶活性催化中心的（第105位氨基酸残基）缬氨酸变成异亮氨酸；之后构建表达载体，以E.coli BL21（DE3）为异源表达宿主获得酶的突变体。 活性测定表明得到的突变体酶温度稳定性显著提高。60℃和70℃下的t1/2值分别达到了12.5h和0.5h，70℃下的半衰期较野生型延长6倍。突变体酶的活性也得到提高。 本发明筛选获得的突变体酶可以在高温下更高效地催化D-果糖异构化为D-阿洛酮糖，为工业化生产D-阿洛酮糖提供了广阔的前景，具有重要的工业应用价值。
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阿洛酮糖
成熟度：通过中试
技术类型：-
应用行业：制造业
技术简介
当前，我国阿洛酮糖行业竞争的竞争现状：产业处于起步阶段，产业集中度相对较低，市场竞争程度相对较小。本项目采用生物转化法生产阿洛酮糖，原料来源广泛，价格低廉，循环转化率较高（60-75%），副产物较少，工艺流程先进，化学污染较小，总生产成本较低。具体表现为：① 原料优势本项目产品以淀粉、菊芋为原料，原料来源广泛易得，价格低廉。因此，项目在原料来源上具有优势，而且也可以从原料角度控制产品的成本与利润。② 工艺及转化率优势目前，食品甜味剂阿洛酮糖工业生产的投料浓度高70%，而本项目采用先进生产工艺，副产物较少或几乎没有，产品转化率可高达60%-75%，从产品得率角度大大降低生产成本。③ 化学污染较小化学法能耗高，产物复杂，纯化困难，副反应多，产生很大化学污染，本项目采用生物转化法生产，化学污染较小。
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一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体及其应用
成熟度：正在研发
技术类型：发明
应用行业：制造业
技术简介
本发明提供的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体，其氨基酸序列是在如SEQ ID NO:1所示的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶氨基酸序列基础上，第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列；或者，第105位的缬氨酸替换为丙氨酸、第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列。 本发明所述突变体的催化活性得到显著提高，达到野生型的179％或223％，而且温度稳定性也得到了显著改善，突变体在60℃下的半衰期是野生型的1.7倍或3.7倍。 对于高温条件下生产D‑阿洛酮糖具有重要意义。
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一种差向异构酶的突变体及其应用
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本发明提供了一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体构建及其应用的方法，酶的突变体的构建方法为：以来自于球形节杆菌（Arthrobacter globiformis）的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因为亲本，通过同源比对及定点突变技术将酶活性催化中心的（第105位氨基酸残基）缬氨酸变成异亮氨酸；之后构建表达载体，以E.coli BL21（DE3）为异源表达宿主获得酶的突变体。 活性测定表明得到的突变体酶温度稳定性显著提高。60℃和70℃下的t1/2值分别达到了12.5h和0.5h，70℃下的半衰期较野生型延长6倍。突变体酶的活性也得到提高。 本发明筛选获得的突变体酶可以在高温下更高效地催化D-果糖异构化为D-阿洛酮糖，为工业化生产D-阿洛酮糖提供了广阔的前景，具有重要的工业应用价值。
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阿洛酮糖
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当前，我国阿洛酮糖行业竞争的竞争现状：产业处于起步阶段，产业集中度相对较低，市场竞争程度相对较小。本项目采用生物转化法生产阿洛酮糖，原料来源广泛，价格低廉，循环转化率较高（60-75%），副产物较少，工艺流程先进，化学污染较小，总生产成本较低。具体表现为：① 原料优势本项目产品以淀粉、菊芋为原料，原料来源广泛易得，价格低廉。因此，项目在原料来源上具有优势，而且也可以从原料角度控制产品的成本与利润。② 工艺及转化率优势目前，食品甜味剂阿洛酮糖工业生产的投料浓度高70%，而本项目采用先进生产工艺，副产物较少或几乎没有，产品转化率可高达60%-75%，从产品得率角度大大降低生产成本。③ 化学污染较小化学法能耗高，产物复杂，纯化困难，副反应多，产生很大化学污染，本项目采用生物转化法生产，化学污染较小。
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一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体及其应用
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技术类型：发明
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本发明提供的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体，其氨基酸序列是在如SEQ ID NO:1所示的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶氨基酸序列基础上，第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列；或者，第105位的缬氨酸替换为丙氨酸、第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列。 本发明所述突变体的催化活性得到显著提高，达到野生型的179％或223％，而且温度稳定性也得到了显著改善，突变体在60℃下的半衰期是野生型的1.7倍或3.7倍。 对于高温条件下生产D‑阿洛酮糖具有重要意义。
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阿洛酮糖
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当前，我国阿洛酮糖行业竞争的竞争现状：产业处于起步阶段，产业集中度相对较低，市场竞争程度相对较小。本项目采用生物转化法生产阿洛酮糖，原料来源广泛，价格低廉，循环转化率较高（60-75%），副产物较少，工艺流程先进，化学污染较小，总生产成本较低。具体表现为：① 原料优势本项目产品以淀粉、菊芋为原料，原料来源广泛易得，价格低廉。因此，项目在原料来源上具有优势，而且也可以从原料角度控制产品的成本与利润。② 工艺及转化率优势目前，食品甜味剂阿洛酮糖工业生产的投料浓度高70%，而本项目采用先进生产工艺，副产物较少或几乎没有，产品转化率可高达60%-75%，从产品得率角度大大降低生产成本。③ 化学污染较小化学法能耗高，产物复杂，纯化困难，副反应多，产生很大化学污染，本项目采用生物转化法生产，化学污染较小。
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阿洛酮糖
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当前，我国阿洛酮糖行业竞争的竞争现状：产业处于起步阶段，产业集中度相对较低，市场竞争程度相对较小。本项目采用生物转化法生产阿洛酮糖，原料来源广泛，价格低廉，循环转化率较高（60-75%），副产物较少，工艺流程先进，化学污染较小，总生产成本较低。具体表现为：① 原料优势本项目产品以淀粉、菊芋为原料，原料来源广泛易得，价格低廉。因此，项目在原料来源上具有优势，而且也可以从原料角度控制产品的成本与利润。② 工艺及转化率优势目前，食品甜味剂阿洛酮糖工业生产的投料浓度高70%，而本项目采用先进生产工艺，副产物较少或几乎没有，产品转化率可高达60%-75%，从产品得率角度大大降低生产成本。③ 化学污染较小化学法能耗高，产物复杂，纯化困难，副反应多，产生很大化学污染，本项目采用生物转化法生产，化学污染较小。
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本发明提供的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体，其氨基酸序列是在如SEQ ID NO:1所示的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶氨基酸序列基础上，第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列；或者，第105位的缬氨酸替换为丙氨酸、第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列。 本发明所述突变体的催化活性得到显著提高，达到野生型的179％或223％，而且温度稳定性也得到了显著改善，突变体在60℃下的半衰期是野生型的1.7倍或3.7倍。 对于高温条件下生产D‑阿洛酮糖具有重要意义。
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阿洛酮糖
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当前，我国阿洛酮糖行业竞争的竞争现状：产业处于起步阶段，产业集中度相对较低，市场竞争程度相对较小。本项目采用生物转化法生产阿洛酮糖，原料来源广泛，价格低廉，循环转化率较高（60-75%），副产物较少，工艺流程先进，化学污染较小，总生产成本较低。具体表现为：① 原料优势本项目产品以淀粉、菊芋为原料，原料来源广泛易得，价格低廉。因此，项目在原料来源上具有优势，而且也可以从原料角度控制产品的成本与利润。② 工艺及转化率优势目前，食品甜味剂阿洛酮糖工业生产的投料浓度高70%，而本项目采用先进生产工艺，副产物较少或几乎没有，产品转化率可高达60%-75%，从产品得率角度大大降低生产成本。③ 化学污染较小化学法能耗高，产物复杂，纯化困难，副反应多，产生很大化学污染，本项目采用生物转化法生产，化学污染较小。
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当前，我国阿洛酮糖行业竞争的竞争现状：产业处于起步阶段，产业集中度相对较低，市场竞争程度相对较小。本项目采用生物转化法生产阿洛酮糖，原料来源广泛，价格低廉，循环转化率较高（60-75%），副产物较少，工艺流程先进，化学污染较小，总生产成本较低。具体表现为：① 原料优势本项目产品以淀粉、菊芋为原料，原料来源广泛易得，价格低廉。因此，项目在原料来源上具有优势，而且也可以从原料角度控制产品的成本与利润。② 工艺及转化率优势目前，食品甜味剂阿洛酮糖工业生产的投料浓度高70%，而本项目采用先进生产工艺，副产物较少或几乎没有，产品转化率可高达60%-75%，从产品得率角度大大降低生产成本。③ 化学污染较小化学法能耗高，产物复杂，纯化困难，副反应多，产生很大化学污染，本项目采用生物转化法生产，化学污染较小。
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本发明提供了一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的突变体构建及其应用的方法，酶的突变体的构建方法为：以来自于球形节杆菌（Arthrobacter globiformis）的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因为亲本，通过同源比对及定点突变技术将酶活性催化中心的（第105位氨基酸残基）缬氨酸变成异亮氨酸；之后构建表达载体，以E.coli BL21（DE3）为异源表达宿主获得酶的突变体。 活性测定表明得到的突变体酶温度稳定性显著提高。60℃和70℃下的t1/2值分别达到了12.5h和0.5h，70℃下的半衰期较野生型延长6倍。突变体酶的活性也得到提高。 本发明筛选获得的突变体酶可以在高温下更高效地催化D-果糖异构化为D-阿洛酮糖，为工业化生产D-阿洛酮糖提供了广阔的前景，具有重要的工业应用价值。
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当前，我国阿洛酮糖行业竞争的竞争现状：产业处于起步阶段，产业集中度相对较低，市场竞争程度相对较小。本项目采用生物转化法生产阿洛酮糖，原料来源广泛，价格低廉，循环转化率较高（60-75%），副产物较少，工艺流程先进，化学污染较小，总生产成本较低。具体表现为：① 原料优势本项目产品以淀粉、菊芋为原料，原料来源广泛易得，价格低廉。因此，项目在原料来源上具有优势，而且也可以从原料角度控制产品的成本与利润。② 工艺及转化率优势目前，食品甜味剂阿洛酮糖工业生产的投料浓度高70%，而本项目采用先进生产工艺，副产物较少或几乎没有，产品转化率可高达60%-75%，从产品得率角度大大降低生产成本。③ 化学污染较小化学法能耗高，产物复杂，纯化困难，副反应多，产生很大化学污染，本项目采用生物转化法生产，化学污染较小。
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本发明提供的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体，其氨基酸序列是在如SEQ ID NO:1所示的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶氨基酸序列基础上，第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列；或者，第105位的缬氨酸替换为丙氨酸、第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列。 本发明所述突变体的催化活性得到显著提高，达到野生型的179％或223％，而且温度稳定性也得到了显著改善，突变体在60℃下的半衰期是野生型的1.7倍或3.7倍。 对于高温条件下生产D‑阿洛酮糖具有重要意义。
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本发明提供的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体，其氨基酸序列是在如SEQ ID NO:1所示的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶氨基酸序列基础上，第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列；或者，第105位的缬氨酸替换为丙氨酸、第124位的天冬酰胺替换为精氨酸以及第63位的丝氨酸替换为甘氨酸的氨基酸序列。 本发明所述突变体的催化活性得到显著提高，达到野生型的179％或223％，而且温度稳定性也得到了显著改善，突变体在60℃下的半衰期是野生型的1.7倍或3.7倍。 对于高温条件下生产D‑阿洛酮糖具有重要意义。